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分析影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素
2022-09-27
細(xì)胞轉(zhuǎn)染指的是將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入到真核細(xì)胞內(nèi)部的技術(shù)。隨著基因和蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實驗中常用的技術(shù)手段之一。對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗，轉(zhuǎn)染試劑、轉(zhuǎn)染方法、細(xì)胞狀態(tài)等都會影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率，本文主要對影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的8個因素做一介紹。1.轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以選擇不同的轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染試劑的選擇又可以根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn)，已經(jīng)有很多細(xì)胞株被成功轉(zhuǎn)染，通過文獻(xiàn)資料可以參考最適的轉(zhuǎn)染試劑，當(dāng)然也要根據(jù)不同的實驗需求選擇。一般來說轉(zhuǎn)染試劑的要求是低毒，...
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胎牛血清使用中的常見問題解答
2022-09-19
1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
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提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法有哪些？
2022-09-15
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化...
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介紹細(xì)胞凍存的主要步驟
2022-09-13
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透...
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原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實驗操作要注意的事項
2022-09-06
原代細(xì)胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)...
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選擇真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30
轉(zhuǎn)染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導(dǎo)入細(xì)胞的過程。采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入外源性核酸會改變細(xì)胞的特性,從而實現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究。轉(zhuǎn)染后,導(dǎo)入的核酸可以瞬時性地存在于細(xì)胞內(nèi),只表達(dá)一段時間且不會復(fù)制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內(nèi),隨著宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術(shù)語與該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展步調(diào)一致,并進(jìn)一步區(qū)分不同的方法和細(xì)胞類型。轉(zhuǎn)染技術(shù)作為一種分析工具，可將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞，有助于機體表征遺傳、蛋白質(zhì)合成、細(xì)...
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影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？
2022-08-19
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過這些資料可選...
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核酸純化的方法及原理
2022-08-19
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提...
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